鏈黴菌（放線菌）超聲破碎條件

    放線菌屬於(yu) 原核生物係統進化樹上的（G＋C）摩爾百分含量（mol％）高的革蘭(lan) 氏陽性菌（Eubacteria）分枝類群，它雖然具有原核生物*的分子生物學特性，但在其不同類群中，細胞壁的化學組分變化很大。在做大腸杆菌超聲時，采用的是400W，破碎5s停5s的方法，效果不錯，但是用在鏈黴菌上，由於(yu) 細胞壁組成差異一般沒什麽(me) 效果。

    鏈黴菌（放線菌）超聲破碎前處理一般是配置成一定濃度的菌懸液。使用超聲破碎時采用的具體(ti) 條件是：
    （1）取細菌的24 h培養(yang) 液於(yu) 5 000 r／min 下離心5 min收集菌體(ti) 。

    （2）用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 緩衝(chong) 液洗滌3次，再用該緩衝(chong) 液將菌體(ti) 配成1：3的菌懸液。置於(yu) 40 mL大塑料試管內(nei) 。

    （3）將大塑料試管置於(yu) 冰浴中，采用超聲波破碎（功率200W，1／2”探頭，破碎30s，間歇30s）。

    （4）破碎液於(yu) 12 000 r／min下高速冷凍離心30 min，收集細胞碎片和上清夜。洗滌菌體(ti) 也可以用預冷的生理鹽水或pH8的Tris－HCl，洗滌一次就可以。另外，超聲劑量隨樣品量、菌體(ti) 改變比較大，功率可以到400－600w，破碎5s，停5s，冰浴，要加終濃度1 mM的PMSF。為(wei) 確定合適的超聲強度和次數，有必要隨時鏡檢觀察菌體(ti) 是否*破碎。